现代精子检测新进展

目前已得到广泛的临床应用，目的大部分医院所进行的精液检查均采取精子自动分析仪进行检查，但由于目前国内的医疗环境非常不尽人意，大多数的精子分析仪产品质量低下，不附合医疗要求，如对无精子症的检查其原理是通过计算机对所检查标本的光点所计算的，几呼所有的无精子症患者在这些不合格的数子自动分析仪下所检查出来的结果很少是正确的。这些问题是一个社会问题，而不是一个简单的医疗问题，亦不是技术问题，所以短期内很难得以完好的解决。就象中国的药品问题不是枪决一个国家药检局局长就能解决问题一样。如这些技术主要有以下几种：

显微照像多次曝光技术

这是由Makler在1978年首次提出和应用，几经改进，已日臻完善的一种定量测定精子活动力的技术。其基本原理是应用装备有照相机的相差显微镜来观察精子并用100ASA全色黑白胶卷对运动中的精子进行多次曝光拍照。为了多次曝光，在显微镜载物台与聚光器光源之间装有直径12cm的黑色“多次闪光盘”，盘上一般开有6条狭缝，缝的数目就是曝光次数。显微镜载物台上配有气幕式加热器，以保持精子在37℃条件下受检。也可采用电热恒温装置维持温度或把显微镜装于有机玻璃保温箱内。

操作方法是把稀释后混合充分的样本置于计数室中央圆台上一般0．2ml液化好的精液加入0．8ml稀释液，盖好盖玻片后静置1分钟以上，待液体流动完全停止，活动的精子也处于静止状态后再行拍照，以免出现模糊的影像。每份标本随机选取10个左右不同的视野拍照。

分析结果时一般不必冲洗成相片，使用能垂直安装的幻灯机，将其100mm透镜换成50mm透镜，使其焦距变为50cm，检查者可移动底片进行分析。通过调节透镜与桌面的距离，可以把投影调节到普通打字纸大小（21cm*28cm）。用红毡头笔做记号，凡不动的精子亮点标成点，活动精子呈现6个连续的光圈链，可分为直线形、锯齿形、弯曲形或弧形四轨迹。

作标记时循其轨迹和实际距离。Makler（1980）报告实际距离比直线距离要长12%，因为60%的精子呈直线运动，30%为锯齿形，另10%为弯曲形和弧形。典型的精子标本可按此计算，非典型标本可通过特殊转换公式从直线位移求出实际移动距离。

Burke（1985）在Makler方法的基础上改用Polarifl照片显示精子运动轨迹，并直接与IRMPC机相联（带绘图板），采用专门编写的Sperm-WorksTM软件和文字处理系统，对结果进行统计处理，大大提高了工作效率和结果的可靠性。

Makler动用这一技术定量测出精子活动率每小时下降5%-10%，正常精子平均运动速度为50-95Hm/s。

显微电视录像技术

显微电视录像系统的功能不断增强，自动化程度和分辨力不断提高，为临床提供了一种客观定量地测定精子运动功能的良好手段。全套装置包括能安装录像摄影机的相差显微镜或三目镜筒体显微镜，盒式录像机，自动编辑控制器或数字式录像计时器，高分辨率三枪彩色摄影机，摄像控制机，高分辨率彩色监视电视机，显微镜与录像机专用接口；还可附带电子光标产生器，电子显微测量尺。根据显微镜测微尺和血球计数板上的刻度来标出荧屏上的实际距离，以便直接求出精子运动的距离，并以各种单位表示；电子比例尺产生器，用以在荧屏上显出一条重叠的标线，校准后适用于比较影像的大小。另外，在显微电视系统外还可再加上显微照像系统。

样本的处理与以前介绍的一些测定方法相似，标本于1小时内测定，适当稀释后置载玻片上用20倍或40倍相差物镜和2。5倍目镜观察，选5-10个不同显微视野，每视野录像5或10秒钟。

1．录像带的分析方法

（1）计算精子活动度：从荧屏的一角开始，沿对角线方向句中心移动，再沿其对角线向邻角移动，这样在荧屏上形成V字形轨迹。记录在这个轨迹上首先遇到的5个精子，记号打在每个精子头与颈部中段之间。然后慢速向前放带2。5秒，相当于实时0．5秒，任何离开原来记号的精子即为活动的精子。再在每个精子头颈连接处作记号，每视野不超过5个精子，然后换视野。重复观察10个或更多视野，观察总计50或更多的精子，就可求出活动度。

（2）测量精子直接运动速度：用电子测量尺测量每个精子前后两点之间的直线移动距离，将50个精子的平均移动距离除以相应的时间，就求出平均直线泳动速度。

（3）计算前向运动精子百分数：即运动速度在25μm/s以上的精子占总的活动精子数的百分率。

（4）测定最大的摆动宽度和摆动频率：正常精子在获能前最大摆动宽度为10．4μm，摆动频率为9．13Hz；获能后分别增加到15．6μm和14．6Hz。

2．Hott等于1985年把苹果H型电脑与显微电视系统相配合，实现了影像分析系统的半自动化。其原理是将显微镜下观察到的实时影像同时反映到电视监视屏幕和计算机文本系统或绘图仪图形上显示。屏幕上的光标由检查者通过绘图板的光笔控制，用光笔跟踪精子活动，每个轨迹表现为一系列的/光点。运动速度等参数由所编程序自动求出，并将精子泳动速度的频率分布作自动统计。研究显示，一个人的不同样本中精子运动速度的差异不超过一个标准差，运动速度与精子计数和其他指标相比是相对稳定的。