无精症、少精症患者中AZF缺失的检测

1976年，Tiepolo等首先报道了位于Y染色体长臂(Yqll)常染色质部分的与精子生成有关的基因组AZFCS。Kent-First等认为AZF包含4个非重叠的功能亚区:AZFa.AZFb,AZFc和AZFd，其估计长度分别为1-3Mbp,l-3Mbp和1.5Mbp,其中AZFc又可分为近端AZFc(即AZFd)、中部AZFc(即DAZ)和远端AZFc(即DAZ的远端区域)3个亚区。

迄今国内外已检测了约6000多个男性不育患者的AZF，发现AZF微小缺失的比例为3%-30%。一般地，AZF区域的大片段缺失仅限于AZFa的缺失，常见于唯支持细胞综合征(Sertolicellonlysyndrome)或重度少精症患者，约占7%。AZF6或AZFc微小缺失既可见于唯支持细胞综合征，也可见于重度少精症患者;而AZFd缺失多见于轻度少精症或畸精症患者。

多重PCR是检测Y染色体微小缺失的有效方法。本文没有检测到AZFa和AZFb区缺失，只检测到AZFb区缺失，这与Simoni等的实验结果相一致。Simoni等对168例非阻塞性、特发性无精症和重度少精症患者的DAZ基因进行了分析，发现3例无精症和2例重度少精症存在DAZ缺失，从而证实了DAZ是AZF的重要候选基因的假说。DAZ基因的缺失发生率在不同的研究报道中差异较大，从1.9%到18%不等。

本文检测到的2个AZFc亚区缺失位点sY254和sY255均位于DAZ基因内，缺失率为3.6%，相对偏低。缺失率差异较大的原因可能与筛选患者的标准有关。Reijo等,Najmabacii等采用辜丸活检来选择患者，把那些活检标本中检测到精子而在精液中找不到或很难找到精子的无精症或少精症患者排除在被检范围内。

因为这些患者属于阻塞性无精症。因此其检测得到的缺失率较高，分别达13%和18%。尽管皋丸活检对于DAZ和AZF的分子遗传学研究非常有用，但对于男性不育就诊者来说难以接受，故一般难于采用这种筛选患者的方法。

DAZ基因只在辜丸组织中表达，表明DAZ基因只参与男性特有的生理过程，也从另一方面支持了DAZ是影响精子生成过程的重要基因的假设。本文检测到的AZFc缺失患者均为无精症，但有些报道发现少精症患者也有AZF缺失。Stuppit、等研究了1对少精症父子的Yq11，发现儿子缺失的片段长于其父，且存在sY243和sY269位点缺失。但父子俩人的RBM1,sY254和sY255均没有缺失。Agul-nik等也认为，DAZ可能并非人类生精过程所绝对必需的基因，也许有其它因素共同起作用，如遗传背景、输精管微环境等。

sY254位点包含1个外显子和1个内含子，其PCR扩增产物为400bpoPCR-SSCP结果显示48例无精症、少精症患者无1例有点突变，是否提示此位点的点突变可能与无精症或少精症关系不大，但尚不能定论。因为样本基因组DNA耗尽的原因，我们未能对84例患者和50例正常对照全部作sY254点突变检测,48例的样本量还不足以检测到点突变，两者之间的关系有待进一步探讨。